导读
PEI（Polyethylenimine）是一类常用的非病毒细胞转染试剂，广泛应用于细胞转染、病毒包装以及重组蛋白表达。在HEK293、CHO等细胞系统中，PEI转染因操作简便、成本较低且转染效率较高，被许多实验室用于AAV、慢病毒以及重组蛋白生产。
本文整理了PEI转染试剂的产品特点、配置方法以及悬浮细胞转染流程，可作为实验人员进行PEI转染实验时的参考指南。
说明：本文所涉及PEI相关产品来源于KyforaBio by Polysciences。
曼博生物（MineBio）为Polysciences品牌在中国地区的独家授权代理商，长期为国内科研用户提供相关技术资料与产品支持。
一、PEI转染试剂产品介绍
Polysciences公司提供一系列PEI转染试剂产品，包括：
- 研究级产品 PEI MAX
- 即用型转染试剂 Transporter 5
- cGMP级转染试剂 MAXgene GMP
这些产品适用于不同规模的：
- AAV病毒载体生产
- 慢病毒（Lentivirus）包装
- 重组蛋白表达
- 抗体生产
PEI MAX是一款高浓缩粉剂，多数科研人员选择在实验室自行配置转染试剂，以获得较低成本和较高转染效率。
大量公开研究和文献表明，在以下系统中具有良好的表现：
- HEK293细胞
- CHO细胞
- Sf9细胞
在重组抗体与病毒载体生产中表现出良好的稳定性与可靠性。
PEI MAX是一种非GMP等级转染试剂，适用于基础科研以及药物研发早期阶段。
二、PEI MAX 40K的特点
PEI MAX 40K 是线性Polyethylenimine（PEI）盐酸盐形式，是线性PEI 25K的升级版本。
相比PEI 25K，其特点包括：
- 水解形式（去乙酰化）
- 盐酸盐形式，具有更好的水溶性
- 更长的连续结构片段
- 质子化氮水平较PEI 25K提高约11%
这些特性有助于在多种细胞系统中获得更稳定的转染效率。
三、PEI转染试剂配置方法（以PEI MAX为例）
PEI粉末配置步骤
说明
未经配制的PEI粉末有效期约为2年。
配制为溶液后：
- 4℃保存可稳定约6个月
- 若用于定性蛋白实验，可延长至约1年
四、悬浮细胞PEI转染流程
1 准备工作
转染前2~3小时，将细胞以：
1×10⁶ cells/mL
密度接种到培养容器中。
2 转染步骤
以 250 mL摇瓶体系 为例：
转染前细胞体积：25 mL
最终培养体积：50 mL
PEI-DNA复合物制备：
注意
加入复合物时需轻轻晃动培养瓶，使其均匀分布。
3 孵育培养
将细胞置于培养箱中培养。
一般情况下：
- 36–48小时：可检测到表达或病毒产生
- 72–96小时：可获得更高产量
五、PEI转染的常见应用
PEI转染试剂常用于以下研究场景：
- HEK293细胞瞬时转染
- CHO细胞重组蛋白表达
- AAV病毒包装
- 慢病毒生产
- 重组抗体表达
总结
PEI转染是一种常见且成熟的非病毒转染方法，在HEK293和CHO等细胞系统中广泛应用于病毒载体生产和蛋白表达。
通过合理优化：
- PEI/DNA比例
- 细胞密度
- 培养时间
可以获得稳定且较高的转染效率。
本文介绍了PEI转染试剂的基本原理、配置方法以及悬浮细胞转染流程，可作为进行相关实验时的参考资料。
PEI转染适合哪些细胞？
您的说法是正确的。 PEI转染确实广泛应用于HEK293、CHO等哺乳动物细胞系，尤其在大规模重组蛋白表达和病毒载体（如AAV、慢病毒）生产中表现出色。我们的产品（如PEI MAX、Transporter 5、MAXgene GMP）在这些应用中经过了充分验证。
PEI转染时DNA和PEI比例是多少？
您的说法是正确的，并强调了优化的必要性。 通常推荐的优化范围确实是质量比1:2至1:4（DNA:PEI）。例如，在慢病毒生产的三质粒系统中，3:1（PEI:DNA）是常见的起始点。最佳比例因细胞类型、质粒系统和培养条件而异，需要通过梯度实验来确定。
PEI转染效率受哪些因素影响？
您列举的因素非常关键。 除了提到的几点，还有一些重要的优化方向：
- 细胞状态：细胞的传代次数、倍增时间和健康度至关重要。
- 培养基与血清：转染时血清的存在与否、培养基的类型会影响复合物的形成和细胞摄取。
- 操作细节：PEI与DNA的混合顺序（必须将PEI稀释液滴加到DNA稀释液中）、复合物孵育时间（通常10-20分钟）、转染后处理（如换液、添加增强剂）都会影响最终结果。
- 试剂质量：DNA的纯度和内毒素水平是基础，PEI工作液的pH值（建议为7.0）和配制方法也直接影响性能。
关键词：#PEI转染试剂 #PEI转染 #HEK293转染 #AAV病毒包装 #PEItransfection
技术资料来源
本文部分技术资料整理自以下研究资料：
PEI转染实验操作步骤与详细说明：
https://www.mine-bio.com/Polysciences-article/PEI_Transfectionsteps.shtml
